Avaliação de métodos para manutenção e preservação de bactéria esporulada produtora da enzima CGTase = Evaluation of methods for maintenance and preservation of sporulating bacteria producer of CGTase enzyme - Cristiane Moriwaki; Cassiana Mazzer; Rúbia Pazzetto; Graciette Matioli (Universidade Estadual de Maringá, 2009)
A conservação de células sem mudanças morfológicas, fisiológicas ou genéticas é uma necessidade da biotecnologia. Bacillus firmus cepa 37 é uma bactéria esporulada produtora da enzima ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase), que transforma o amido em ciclodextrinas (CDs). O objetivo deste estudo foi avaliar a manutenção e preservação de B. firmus cepa 37 estocada em meio de cultivo sólido, solo estéril e em glicerol a baixa temperatura (-70ºC). Para avaliação do melhor método de manutenção da bactéria foram utilizados procedimentos de imobilização das células em matrizes inorgânicas. As células imobilizadas foram submetidas ao teste do efeito da biomassa inicial e à microscopia eletrônica de varredura (MEV). O repique não foi um método adequado, pois a cepadiminuiu a produção de CGTase. A estocagem em solo estéril mostrou-se eficaz e a produção da enzima mantida constante. A conservação a baixas temperaturas também foi satisfatória, com contagem de células praticamente a mesma após 360 dias. A imobilização, avaliada por MEV, não mostrou diferença na adsorção das células conservadas pelosdiferentes métodos. O mesmo ocorreu para o teste do efeito da biomassa inicial, que apresentou maior produção de beta-CD quando do uso de 1,5 g de células. The conservation of cells without morphologic, physiologic or genetic changes is a biotechnology necessity. Bacillus firmus strain 37 is a sporulating bacteria that produces the cyclodextrin lycosyltransferase(CGTase) enzyme, which transforms starch into cyclodextrins (CDs). This study aimed to evaluate the maintenance and preservation of B. firmus strain 37 stored in a solid medium, sterile soil and in glycerol at low temperature (-70ºC). In order to evaluate the best bacteria maintenance method, cell immobilization procedures were used on inorganic matrices. The immobilized cells were submitted to the initial biomass effect test and scanning electron microscopy (SEM). Periodic transfer was not an appropriate method, because the strainreduced the production of CGTase. The storage in sterile soil proved effective and the enzyme production remained constant. The conservation in low temperatures was also satisfactory, with cell counts practically the same after 360 days. The immobilizationevaluated by SEM did not show any difference in the adsorption of the cells preserved by the different methods. The same happened for the initial biomass effect test, which presented higher beta-CD production when 1.5 g of cells was used.